目的 建立一种快速、准确的微滴式数字 ＰＣＲ（ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ，ｄｄＰＣＲ）检测方法，用于检 测实验动物和环境中的金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，ＳＡ）。

方法 针对 ＳＡ 耐热核酸酶基因（ｎｕｃ）的 保守区域，设计并合成一对特异性引物和探针，通过实验优化，确定最佳反应条件，检测动力学范围，验证该方 法的特异性和方法再现性；以相同的模板分别进行 ｄｄＰＣＲ 和实时荧光定量 ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）方法反应，检测两种 方法的互换性；最后将该方法用于各种临床样品的检测。

结果 建立的 ＳＡ ｄｄＰＣＲ 方法的动力学范围为 １００ ～ １５ ０００ ｃｏｐｉｅｓ／ μＬ，检测极限为 ２. ５ ｃｏｐｉｅｓ，定量极限为 １０ ｃｏｐｉｅｓ；检测该方法的特异性，结果仅 ＳＡ 有阳性微 滴，其他病原体均无阳性微滴；对 ３ 个平行样本进行测量后，计算得到其标准偏差与相对标准偏差发现，在 ｄｄＰＣＲ 的动力学检测区间内，随着目标拷贝数的逐渐降低，相对标准偏差呈现上升趋势，然而始终低于 ２５％ 的，这一结果表明该检测方法具有良好的稳定性。 ｔ 检验分析 ｄｄＰＣＲ 和 ｑＰＣＲ 方法的检测结果，显示两种方 法所得拷贝数均无明显差异。 共检测 １０ 份临床样本，有 ２ 份临床样本为阳性，其他均为阴性，该结果与 ｑＰＣＲ 检测结果一致。

结论 建立的检测 ＳＡ 的 ｄｄＰＣＲ 方法灵敏度高、特异性强、稳定性好和重复性好，可用于实验 动物 ＳＡ 的检测。

阅读原文：实验动物金黄色葡萄球菌微滴式数字ＰＣＲ检测方法建立和优化.pdf